
小(xiǎo)鼠麻醉指導原(yuán)則
目的
本(běn)文是由ARC獸醫人員設(shè)計的小鼠麻醉(zuì)指導原則,旨在提供一般建議。這並不意味著它包含了(le)適用於小鼠(shǔ)的所有可能藥物組合的詳盡(jìn)列表。具體的麻醉方案應根據特定情況和研究需求與所在機構的獸醫合作製定(dìng)。
麻醉是使動物完全或部分失去感覺,伴隨或不伴隨意(yì)識喪(sàng)失(shī)。動物可(kě)能需要麻醉進行手術、可能引起疼痛的非手術操作,或需要固定的非疼痛操作。在(zài)麻醉前、麻醉過程中和(hé)麻醉後(hòu),必須采取(qǔ)措施(shī)確保動物的安全和麻醉的有效性。
麻醉可通過胃腸外給(gěi)藥或吸入給藥的方式進行。藥物的選(xuǎn)擇取決於具體(tǐ)操作、研究目的和其他因素,如動物的年齡。對於新生小鼠,有些特別考慮下文進行了概述。如對(duì)藥物選擇有疑問,請谘詢所在機構的獸(shòu)醫。
01、麻醉的一般指導原則和注意事項
適應期(qī):建議所有動物在運輸後適應一周,以防止應激引起的反應。動物至少需要72小時才能恢複到基(jī)本(běn)生(shēng)理狀態。
禁食(shí):由於小鼠無法嘔吐,通常麻醉前無需禁食。然而,如需禁食(例如為了(le)保持體重(chóng)),因小鼠的高代謝率,禁食時間不(bú)應(yīng)超過2-3小時。請注意,切勿限製(zhì)飲水。
眼睛保護:在麻醉狀態下,小鼠的眼睛會持(chí)續睜開,可能導致角膜幹燥和(hé)損傷。因此,在如下條件下,應塗(tú)抹眼膏(如Puralube® 或(huò) Lacrilube®)來保護(hù)眼睛。
麻醉持續時間超過 5 min;
通過麵罩進(jìn)行麻醉。
監護:無論使用何種(zhǒng)麻醉劑,均應監測麻醉狀態下的小鼠,以確保心髒和呼吸功能不被過度抑製,以及麻(má)醉深度適當。
在沒有(yǒu)專用設備的情況下,可以監測以下麻醉小鼠的參數:
麻醉深度:通過掐指檢查;
呼吸頻率和模式:正常(cháng)未受幹擾的呼吸率約為 180 bpm,麻醉期(qī)間可接受 50% 的緩慢下降速率(lǜ);
粘(zhān)膜顏色:應為粉紅色而非藍色或灰色;
體溫:可(kě)使用直腸溫度計監測(cè)體(tǐ)溫,體溫應保持在 36℃ 以上(shàng);
血氧飽和度和心率:可用專用的齧齒類動物脈搏式血氧(yǎng)儀(yí)監測血氧飽和度 (> 95%) 和心率(300-800 bpm);
如對監護或監護(hù)設備有任何(hé)問題,請與所在機構的獸醫聯係。
保溫:所有種(zhǒng)屬在麻醉狀態下均存在低(dī)體溫的風險。小鼠由於體表麵積與(yǔ)體重比高,尤其容易受(shòu)到影(yǐng)響。低體溫對動物會產生顯著的生(shēng)理應激,可能(néng)延長恢複時間並有潛在致命風險。
在所有(yǒu)麻醉過程中提供(gòng)額外的保溫措施。
補充熱源包括循環水毯、電熱墊和可在微波或水浴中加熱的市售產品(如等溫墊或凝膠加熱器)。
切勿直接將動物放在熱源上。
如對使用(yòng)或購買額外的保溫來源有疑(yí)問,請與您所在機構的獸醫聯係。
補液:在麻(má)醉時間較長或動物患病、老(lǎo)年或(huò)虛弱的情況下,考慮腹腔或皮下注射溫熱的液體。更多信息請谘詢您(nín)的獸醫。
恢複:持續監測動物直至其完全恢複。
在幹淨的籠子裏,將動物放在紙(zhǐ)巾(jīn)上(不使用墊料)。這樣可以最大程度(dù)地減少氣管阻塞或肺炎的風險。
麻醉後的動(dòng)物單獨(dú)放在一個籠子裏進行恢複。
恢複期間繼續(xù)提供額外的保溫。
當動物能夠走(zǒu)動時,將(jiāng)其送回(huí)原籠中子,並提供飼料和水。
根(gēn)據(jù)所進(jìn)行的手術,為了避免同籠夥伴(bàn)啃縫線或切口處的創傷,小鼠可能需要在術後階段單獨(dú)飼(sì)養。任何單獨飼養的計劃都(dōu)應包括在IACUC方案中,以(yǐ)便進行(háng)審查和批準。
02、麻醉藥物和程序
吸入麻醉劑: 異氟烷(wán)是首選的吸入(rù)麻醉劑。 起效快、恢(huī)複(fù)可靠。
A. 吸(xī)入麻(má)醉可以通過滴瓶法(fǎ)、誘導室(shì)、麵(miàn)罩或氣管插管使用精密蒸汽器進行。
i.滴瓶法:
a.請勿使小鼠直接接觸液體吸入麻醉劑(可通過在棉花(huā)或紗布上放置不可滲透的網格來實現)。
b. 由於無法(fǎ)控製室內(nèi)的麻醉(zuì)劑濃度(dù),並且濃度可能迅速達到(dào)有毒水平,因此該方法僅適用於非常短的手術,如尾部(bù)活檢、皮下腫瘤植入或麵罩(zhào)麻醉前的誘導。
ii.誘導室、麵罩和氣管插管:
a.這些(xiē)需要配備氧氣源和精密蒸發器的氣體麻醉(zuì)機。一些研(yán)究單位可能使用室內空氣而(ér)不是純氧作為氣(qì)源,這也是可接受的。
b.蒸發(fā)器必須與特(tè)定的吸入麻醉劑兼容。
c.由於小鼠呼吸能力較(jiào)小,使用非循環(huán)呼吸係(xì)統。
iii. 當使用吸入性麻醉時,使用通風櫃或配備氣體(tǐ)清除(chú)係統的麻醉係統,以盡量減少職業暴露於排出氣體。
B. 注射麻醉劑(jì):氯胺酮/賽拉嗪聯合使(shǐ)用是小鼠的(de)首選注射麻(má)醉劑。
下麵列出了其(qí)他常用的注射劑。
i. 小(xiǎo)鼠對(duì)各種麻醉藥的敏感(gǎn)性差異顯著(zhe)。 年齡、體質、品係、健康狀況、基因調控和性別等因素都可能影響麻醉敏感性。以下劑量(liàng)僅為一般指(zhǐ)導原則,基於上述因素可能存在顯著差異。在您的方案中添加麻醉劑時,建議提供一個範圍,以允許(xǔ)根據(jù)每隻動物的特定需求(qiú)進行給藥。
ii. 不建議在小鼠中進行肌肉注(zhù)射(IM),因為可能導致組(zǔ)織刺激、跛(bǒ)行和自殘等並發症。
*一個(gè)很好的初始方案是 100 mg/kg 氯胺酮和(hé) 7 mg/kg 塞拉嗪。
**阿替美(měi)唑(5 mg/mL)是右美托咪定(0.5 mg/mL)濃度的(de) 10 倍。
您需要 4-6 倍於(yú)右美托咪定體積的阿替美(měi)唑(5 mg/mL)來逆轉右美托咪定。然而,阿替美(měi)唑的安全(quán)範圍非常高,因此如果逆轉非常緊急,給予(yǔ)右美托咪定等體積(jī)的阿替美唑,可使阿(ā)替美(měi)唑的劑量增加 10 倍,這是安全的。
同樣(yàng),使用與塞拉嗪(20 mg/mL)等體積的阿替美(měi)唑 (5 mg/mL) 逆轉也(yě)有效。雖然塞(sāi)拉嗪具有更高的濃度(20 mg/mL),但阿替美唑(5 mg/mL)更純淨,且與(yǔ)α2 受(shòu)體結合更緊密,因此等體積逆轉塞拉嗪也可行。
C. 注射麻醉劑的一(yī)種類型是局(jú)部麻醉劑。
i. 局麻藥(yào)通過特異性結合神經(jīng)細胞膜上的電壓門(mén)控 Na + 通道(dào)來阻斷神經衝動。
ii. 給藥途徑包括粘膜(鼻、眼等)局部(bù)給藥或直接注射(shè)到組織(zhī)和神經束周圍。
iii. 在疼痛刺(cì)激(如切(qiē)口)之前給予局部麻醉(zuì)劑(jì)被認為是輔助鎮痛藥物,與阿片類(lèi)和 非甾體抗(kàng)炎(yán)藥(NSAID)一起使用。
iv. 由於持(chí)續時間較短(數小(xiǎo)時),不鼓勵將局部(bù)麻醉劑(jì)作為主要鎮痛藥物使用,
03、對(duì)小鼠麻醉的特殊考(kǎo)慮:仔鼠麻醉
目前文獻中描述了幾種適用於新生齧齒動物的麻醉方法,包括注射麻醉、吸入麻(má)醉和低(dī)溫麻醉。
新生齧齒動物(wù)的麻醉會導致親代啃食後代的問題。可通過確保新(xīn)生仔鼠完全恢複後再歸還給母鼠來減少這種情況。其他措施包括讓幼仔接觸來自於母鼠籠中的汙染墊料,並將幼仔放在窩仔中間位置。
低溫麻醉
低(dī)溫麻醉隻適用於7日齡以(yǐ)下的新生齧齒動物,並且不應用(yòng)於持續時間(jiān)超過30分鍾的手術。
動物不應直接置於冰上(在動物和底層冰(bīng)浴之間使用乳膠(jiāo)手套或其他物質)。
當足部反(fǎn)射消失時,動物已達到適當的麻醉水平。
手術(shù)過程中請(qǐng)勿使用白熾燈,因為它會使手術(shù)區域(yù)變熱,導致(zhì)動物從手術麻醉(zuì)狀態中蘇醒。
麻醉後,動(dòng)物應緩慢複溫。快(kuài)速升溫可能(néng)會導致組(zǔ)織損傷。可使(shǐ)用循環水毯、加熱墊 (40℃) 或培(péi)養箱 (33℃) 中給動物(wù)重新升溫。
幼仔能夠在無(wú)直接物理刺激的情況下移動後,可將其歸還給母鼠。
吸入麻醉
新生齧(niè)齒動物可能比成年齧(niè)齒動物需要更長的吸入麻醉誘導(dǎo)時間。
在麻醉盒中進行誘導通(tōng)常需 5% 異氟烷,維持(麻醉誘導盒或鼻錐)需 1-2%(流(liú)速 = 0.3-0.6 L/min)。
注射麻醉
氯胺酮/塞拉嗪是 7 日齡以上(shàng)小(xiǎo)鼠的推薦注射麻(má)醉劑(jì):通過 27g 針頭 IP 注射 50-150 mg/kg 氯胺酮和 5-10 mg/kg 塞拉嗪(最大體積 = 0.5 mL)。
對於7日齡以上(shàng)的小(xiǎo)鼠,推薦使用氯胺酮/塞拉嗪作為注射麻醉劑:使用27g針頭腹腔注射50-150 mg/kg氯胺(àn)酮和5-10 mg/kg塞拉嗪(最大體積(jī)=0.5 ml)。